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18/04/12 09:58
참고 링크:
http://www.ibric.org/myboard/read.php?Board=exp_qna&id=596137&ksr=1 스킴 밀크로 difco라는 해외꺼 많이 썼는데 국산 탈지분유로도 된다는게 핵심입니다! 국뽕이 차오르...나요?
18/04/12 10:40
설명하지요! 저상태는 membrane이라고 불리는 종이에 여러 단백질들이 전기영동으로 인해 크기별로 분리해져있는 상태입니다. 이 상태에서 항원 항체 반응을 이용해 우리가 양을 알고싶은 단백질만 그에 특이적인 항체를 이용, 저런식의 검은 반점 형태로 확인할 수 있죠. 하지만 항체가 100% 우리가 의도했던 단백질에 붙는게 아니라 엉뚱한 곳에 붙을 가능성도 있습니다. (비특이적 부착; 사진에서 멀티밴드라고 하는 부분) 그래서 항체 처리단계전에 BSA라는 단백질을 처리해놓아서 항체의 비특이적 반응을 최대한 줄여주는 역할을 하죠. 이 과정이 blocking 블락킹 과정입니다. BSA는 Bovine serum albumin 이라고 해서 소의 혈청에서 분리한 albumin 단백질인데 문제는 가격이 비쌉니다. 보통 5%로 사용을 하는데 웨스턴 실험을 많이 하는 실험실일수록 가격부담이 상당해요. 그래서 굳이 소 혈청 단백질이 아닌 탈지분유의 유단백질로 blocking 과정을 진행 많이 합니다. 외국 difco 회사꺼는 아무래도 수입해오다보니까 들어오는데 시간도 걸리니 값싸고 쉽게 구하는 국산 탈지분유를 쓰는 실험실도 많습니다. 그럼 설명충은 이만~
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